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구강상피세포의 냉동보관 방법에 따른 세포생존률 비교

COMPARISON OF VIABILITY OF ORAL EPITHELIAL CELLS STORED BY DIFFERENT FREEZING METHODS

대한치과보존학회지 2009년 34권 6호 p.491 ~ 499
KMID : 0362320090340060491
백도영 ( Baek Do-Young ) - 연세대학교 치과대학 치과보존학교실

이승종 ( Lee Seung-Jong ) - 연세대학교 치과대학 치과보존학교실
정한성 ( Jung Han-Sung ) - 연세대학교 치과대학 치과보존학교실
김의성 ( Kim Eui-Seong ) - 연세대학교 치과대학 치과보존학교실

Abstract

본 연구의 목적은 구강상피세포를 배양한 후 각기 다른 조건의 냉동 보존법으로 6일간 보존 시 각각의 세포의 활성도를 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity의 방법을 이용하여 비교 평가하기 위함이다. 각 실험군당 1×106개의 세포를 다음의 방법으로 6일간 냉동 보존한다. Freezing container에 담아 1℃/min 의 냉동속도로 -70℃까지 냉동 후 -196℃에 냉동하여 보관한 일반 냉동 보존군, 세포를 바로 -196℃의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동 보존군, 4℃에서 -35℃까지 -0.5℃/min 속도로 서서히 냉동시킨 뒤 -196℃에 냉동한 저속 냉동 보존군, 2 Mpa,3 Mpa의 압력을 가하고 -0.5℃/min 속도로 4℃에서 -35℃까지 서서히 냉동시킨 뒤 -196℃에 냉동한 2 Mpa, 3 Mpa압력 저속 냉동 보존군으로 나누었다. 6일 후 냉동되었던 세포를 급속 해빙하여 각각의 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity 값을 측정하여 비교하였다. 실험 결과 2 Mpa 혹은 3 Mpa의 압력을 이용한 저속 냉동법이 저속 냉동법 및 급속 냉동법 보다 세포 활성도에 있어 우수한 경향을 나타내었다.

This study examined the influence of the storage methods on the viability of oral epithelial cells using conventional cell freezing storage, slow freezing preservation, rapid freezing preservation, and slow freezing preservation with a pressure of 2 Mpa or 3 Mpa. The cell viability was evaluated by cell counting, WST-1 and the clonogenic capacity after 6 days of freezing storage. After 6 days, the frozen cells were thawed rapidly, and the cell counting, WST-1, and clonogenic capacity values were measured and compared. 1. The results from cell counting demonstrated that conventional cryopreservation, slow freezing under a 2 Mpa pressure and slow freezing under a 3 Mpa pressure showed significantly higher values than slow freezing preservation and rapid freezing preservation (p<0.05). 2. The results from the optical density by WST-1 demonstrated that slow freezing under a 2 Mpa pressure showed significantly higher values than slow freezing preservation and rapid freezing preservation(p<0.05). 3. The clonogenic capacity demonstrated that slow freezing under a 2 Mpa pressure showed significantly higher values than slow freezing preservation and rapid freezing preservation (p<0.05). [J Kor Acad Cons Dent 34(5):491-499, 2009]
KeyWords
WST-1, Cell counting, Clonogenic capacity, 압력 저속 냉동, 저속냉동, 급속냉동
WST-1, Cell counting, Clonogenic capacity, Slow freezing under pressure, Slow freezing, Rapid freezing
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