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누드마우스의 흉강에 폐암세포주의 주입에 의한 종양형성과 HER2/neu와 TGF-β1의 발현

Tumorigenesis after Injection of Lung Cancer Cell Line (SW-900 G IV) into the Pleural Cavity of Nude Mice

대한흉부외과학회지 2010년 43권 6호 p.588 ~ 595
박억숭 ( Park Eok-Sung ) - 고신대학교 의과대학 복음병원 흉부외과학교실

김송명 ( Kim Song-Myung ) - 고신대학교 의과대학 흉부외과학교실
김종인 ( Kim Jong-In ) - 고신대학교 의과대학 흉부외과학교실

Abstract

배경: 종양의 종류에 따라 발현되는 종양 항원의 종류도 다양하며 그 발현률의 차이는 더욱 다양하 다. 이와 같은 이유로 폐암의 치료연구를 위해서는 인체를 대신할 만한 동물 모형이 절대 필요하다. 저자는 편평상피세포암의 세포주를 배양하여 Nude mice의 흉강 내에 주입하는 방법으로 종양형성을 시도하여 종양형성의 성공 유무와 조직학적 변화와 함께 폐암과 관련 있는 EGFR (epidermal growth factor receptor)의 수용기 중 하나인 HER2/neu 종양 유전자와 세포 성장 억제 작용과 악성화 과정에서 의 저항성으로 작용하는 TGF-β1을 각각 정량 하도록 하여 인공적인 동소 폐암의 경우 암유전자의 발현에 관하여 조사해보고자 하였다.

대상 및 방법: 면역성이 없는 20마리의 수컷생쥐(Male BALB/c nude mice)로 5마리를 대조군으로 하였으며, 나머지 15마리는 실험군으로 하고 체중은 20∼25 gm (Orient, Japan)의 범위에 있었다. HER2/neu는 채혈하여 보관된 혈액의 혈청을 분리하여 CLIA (chemiluminiscent immunoassay) 법으로 정량적으로 측정 하였으며 TGF-β1은 immunosandwitch법을 이 용하여 정량 분석하였다. 통계학적 분석을 위하여 SPSS통계(SPSS Version10.0, USA)프로그램을 이용 하였으며 Student T test를 하였으며 p값이 0.05 미만인 경우를 유의성이 있는 것으로 간주하였다.

결과: 정상 대조군에서나 인위적으로 주입한 폐암 세포주에 의한 폐암이 만들어 진 이후에도 HER2/ neu 유전자의 증폭은 전혀 반응을 나타내지 못하였다. 하지만 TGF-β1 대조군의 정량치는 28,490± 8,549 pg/mL이었고 폐암 세포 주입군은 42,362±14,449 pg/mL로 유의하게 1.48배 높게 나왔다(p< 0.483). HER2/neu 유전자와 TGF-β1은 유의한 상관관계가 없는 것으로 나타났다.

결론: TGF-β1유전 자는 대조군에 비하여 1.48배 정도의 증폭이 발현 되었다. TGF-β1의 증폭은 Nude mice에서 발암에 의한 생체 치유 억제 기전이 확실히 작동하고 있다는 것을 의미 하며, 인체의 조기 폐암의 발견에 역 할을 가능케 하는 정량 검사법으로 이용할 수도 있을 것이다.

Background: Base on types of tumor, the types of expressed tumor is diverse and the difference in its expression rate is even more various. Due to such reasons an animal model is absolutely needed for a clinical research of lung cancer. The author attempted oncogenesis by cultivating a cell line of non-small cell carcinoma and then injecting it inside thoracic cavities of nude mice. The author conducted quantitative analyses of HER2/neu tumor gene - an epidermal growth factor receptor (EGFR) related to lung cancer, and TGF-β1, which acts as a resistance to cell growth inhibition and malignant degeneration. In order to investigate achievability of the oncogenesis, histological changes and the expression of cancer gene in case of orthotopic lung cancer is necessary.

Material and Method: Among 20 immunity-free male BALB/c, five nude mice were selected as the control group and rest as the experimental group. Their weights ranged from 20 to 25 gm (Orient, Japan). After injection of lung cancer line (SW900 G IV) into the pleural cavity of nude mice, They were raised at aseptic room for 8 weeks. HER2/neu was quantitatively analyzed by separating serum from gathered blood via chemiluminiscent immunoassay (CLIA), and immunosandwitch method was applied to quantitatively analyze TGF-β1. SPSS statistical program (SPSS Version 10.0, USA) was implemented for statistical analysis. Student T test was done, and cases in which p-value is less than 0.05 were considered significant.

Result: Even after lung cancer was formed in the normal control group or after intentionally injected lung cancer cell line, no amplification of HER2/neu gene showed reaction. However, the exact quantity of TGF-β1 was 28,490±8,549 pg/mL, and the quantity in the group injected with lung cancer cell was 42,362±14,449 pg/mL, meaning 1.48 times highly significant (p<0.483). It proved that HER2/neu gene TGF-β1 had no meaningful interconnection.

Conclusion: TGF-β1 gene expressed approximately 1.48 times amplification in comparison to the control group. The amplification of TGF-β1 meant somatic recuperation inhibition mechanism due to carcinogenesis in nude mice was definitely working. It may be implemented as a quantitative analysis that allows early detection of lung cancer in human body.

키워드

비소세포암; 누드마우스; 종양인자
Carcinoma; non-small cell; lung; Mice; transgenic; Neoplasm marker
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