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Avian Influenza H9N2 Virus의 HA와 NA 단백질 발현, 정제 및 항혈청 생산

미생물학회지 2008년 44권 3호 p.178 ~ 185
이현지 ( Lee Hyun-Ji ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소

이영민 ( Lee Young-Min ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
권준헌 ( Kwon Jun-Hun ) - 농림부 국립수의과학검역원
주이석 ( Joo Yi-Seok ) - 국립수의과학검역원
윤상임 ( Yun Sang-Im ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
송병학 ( Song Byung-Hak ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
김정민 ( Kim Jung-Min ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
김진경 ( Kim Jin-Kyung ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
강영식 ( Kang Young-Sik ) - 충북대학교 의과대학 미생물학교실, 의학연구소
구용범 ( Koo Yong-Bum ) - 인제대학교 의생명공학대학 생명공학부
전익수 ( Jeon Ik-Soo ) - 농촌진흥청 축산과학원
변승준 ( Byun Sung-June ) - 농촌진흥청 축산과학원 응용생명공학과
이윤정 ( Lee Yun-Jung ) - 국립수의과학검역원
박종현 ( Park Jong-Hyeon ) - 국립수의과학검역원

Abstract

조류 독감바이러스(avian influenza virus, AIV)는 사람에게서 발생하는 인플루엔자 대유행에 중요한 역할을 한다. 특히 최근 AIV H9N2형에 의한 가금류 감염이 빈번히 나타나고 있어 인체 감염이 상당히 우려되는 실정이다. 본 연구에서는 최종적으로 AIV의 HA와 NA 단백질에 특이적으로 반응하는 항혈청을 생산하고자 하였다. 먼저 감염된 닭에서 분리된 AIV H9N2 한국분리주 A/Ck/Kr/MS96/96의 게놈 RNA로부터 RT-PCR 방법으로 HA와 NA 단백질 N-말단부위에 해당하는 염기서열을 증폭하였다. 이렇게 증폭된 DNA 단편은 E. coli 발현벡터 pGEX4T-1에 삽입한 후, BL21 세포에서 각각의 GST fusion protein (GST-HA1n와 GST-NAn) 형태로 발현하였다. GSTHA1n와 GST-NAn은 모두 glutathione sepharose column을 사용하여 분리 및 정제하였으며, 정제된 단백질을 항원으로 사용하여 토끼 항혈청을 생산하였다. 생산된 항혈청의 항원특이성은 AIV H9N2 한국분리주 A/Ck/Kr/MS96/96로 감염된 MDCK 세포의 cell extract를 사용하여 immunoblotting을 수행함으로써 확인하였다. 본 실험 결과 AIV H9N2의 HA와 NA 단백질 N-말단부위에 해당하는 재조합 GST fusion protein과, 이들 각각의 단백질에 특이적으로 반응하는 항혈청은 앞으로 AIV 감염의 진단 뿐만 아니라, AIV에 대한 기초연구에 중요한 재료로 사용될 것으로 기대한다.

키워드

antiserum;avian influenza virus;GST;H9N2;HA;NA;protein expression
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