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초고속 이단계 PCR에 의한 Shiga 독소 타입 1의 신속 검출법

미생물학회지 2008년 44권 3호 p.203 ~ 211
김일욱 (  ) - 경기대학교 자연과학대학 생명과학과

권순환 ( Kwon Sun Hwan ) - 아주대학교 의과대학 만성염증질환센타
강민희 ( Kang Min-Hee ) - 경기대학교 자연과학대학 생명과학과
조성학 ( Cho Sung-Hak ) - 질병관리본부 감염병센터

Abstract

Shiga 독소 생성 대장균(Shiga toxin-producing Escherichia coli; STEC)을 가장 빠르게 검출할 수 있는 초고속 이단계 PCR 방법을 개발하였다. 검색 대상 유전자는 STEC에서 생성되는 Shiga 독소(Shiga toxin; Stx)를 암호화하고 있는 유전자 stx1이며, 1쌍의 stx 유전자 특이 primer를 사용하여 검출을 수행하였다. 초고속 PCR (Ultra-rapid PCR)은 microchip 기반의 6 μl PCR 용량의 Real-time PCR을 사용하고, PCR 회전의 각 단계 중 혼성과 중합을 한 단계로 하였을 뿐 아니라, 각 단계의 적용시간을 각 1초, 3초(해리, 혼성/중합)가 되게 극단적으로 줄여, 검사소요시간을 최소화하였다. 35회전의 PCR 진단에 사용된 시간은 6분 38초였으며, 용융온도분석에서 stx1 특이 유전자가 검출되었음을 확인하는 데까지 총 7분 28초가 소요되었다. 또한 민감도 측정에서 3×100 CFU/reaction까지 성공적으로 검출 가능함이 확인되었고, 용융온도분석에서 이 증폭산물은 일정한 81.42±0.34oC의 용융온도를 갖는 것으로 확인되었다. 이 검사법을 다양한 STEC 균주들에게 적용하여 그 성능을 검증하였으며, 이로써 본 초고속 이단계 PCR 방법은 Shiga 독소 생성 대장균의 초신속 검출에 바로 적용될 수 있을 것으로 기대한다.

키워드

rapid diagnosis;Shiga toxin-producing Escherichia coli;Shiga toxin type 1;stx1;ultra-rapid real-time PCR
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KCI