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세포배양 유래 생물의약품 생산 공정에서 Reovirus Type 3 안전성 검증을 위한 Real-Time RT-PCR

미생물학회지 2008년 44권 3호 p.228 ~ 236
이동혁 ( Lee Dong-Hyuck ) - 한남대학교 생명나노과학대학 생명과학과

김인섭 ( Kim In-Seop ) - 한남대학교 생명나노과학대학 생명과학과
정효선 ( Jeong Hyo-Sun ) - 한스바이오메드(주) 한스대덕연구소
김태은 ( Kim Tae-Eun ) - 한남대학교 생명나노과학대학 생명과학과
이정숙 ( Lee Jung-Suk ) - 한스바이오메드(주) 한스대덕연구소
오선환 (  ) - 한남대학교 생명나노과학대학 생명과학과

Abstract

세포배양 유래 생물의약품 생산 공정에서 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. Reovirus type 3 (Reo-3)는 동물 세포주와 동물 세포 배양 공정에 오염되는 대표적인 바이러스이다. 세포배양 유래 생물의약품의 Reo-3 안전성을 확보하기 위해, 세포주, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 Reo-3를 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 Reo-3 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 real-time RT-PCR 시험법을 확립하였다. Reo-3에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 Reo-3 RNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time RT-PCR 민감도는 3.2×100 TCID50/ml이었다. 확립된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성(specificity)과 재현성(reproducibility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time RT-PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 Reo-3를 오염시킨 CHO 세포에서 Reo-3 검출 시험을 실시한 결과 Reo-3를 감염시킨 CHO 세포와 세포배양 상청액에서 Reo-3를 정량적으로 검출할 수 있었다. 또한 바이러스 필터 공정에서 Reo-3 제거 효과를 감염역가 시험법과 비교 검증한 결과 더 빠른 시간에 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 위와 같은 결과에서 확립된 Reo-3 real-time RT-PCR 시험법은 생물의약품 안전성 보증을 위한 세포주 검증, 생물의약품 생산 공정 검증, 바이러스 제거 공정 검증 등에서 감염역가 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.

키워드

Chinese hamster ovary (CHO) cell;real-time RT-PCR;reovirus type 3;virus validation
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KCI