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Hela 세포와 MCF10 세포 주에서 판코 빈혈 A 유전자 다량 발현

Overexpression of the Fanconi Anemia A Gene in Hela and MCF10A Cells

대한혈액학회지 2006년 41권 1호 p.1 ~ 7
박우현 ( Park Woo-Hyun ) - 전북대학교 의과대학 심리학교실

Abstract

배경: 판코 빈혈(Fanconi anemia)은 열성으로 유전되는 질환으로, 임상적인 특징으로는 성장에 장애가 오며, 진행성 골수 이상과 암으로 대부분 사망하는 질환으로 알려져 있다. 특히 환자 세포에서 나타나는 주요 특징은 DNA crosslink인 mitomycin C (MMC)나 diepoxybutane에 대해 민감하게 반응을 한다.

방법: 본 실험을 하기 위해서 Hela 세포주와 MCF 10A 세포주를 사용하였으며, FANCA 단백을 발현하는 안정화 세포주를 만들기 위해서 retrovirus을 이용하였다. FANCA 단백을 발현하는 세포주의 선택을 위해서 puromycin을 사용하였으며, MMC에 대한 세포주들의 성장 억제 변화를 보기 위해서 MTT assay를 이용하였다.

결과: 성공적으로 FANCA 단백을 발현하는 HeLa 세포주와 MCF10A 세포주를 얻었으며, 이들 세포에 MMC을 처리하여 세포의 성장 억제를 분석한 결과, MMC 농도에 따라(0.01~10uM) HeLa 세포주와 FANCA를 발현시킨 HeLa 세포주는 세포성장의 차이에 아무런 변화를 보이지 않았다. MCF10A 세포주는 MMC 농도 0.01uM 부터 성적 억제가 관찰되었고(72 시간 배양), FANCA를 발현시킨 MCF10A 세포주는 MMC 농도(0.01~0.1uM)에서 성장이 확연히 덜 억제됨을 관찰할 수 있었다.

결론: FANCA 단백은 breast 세포주인 MCF10A에서 MMC에 대한 감수성을 억제하는데 중요하게 작용하는 하나의 인자임을 확인하였다.

Background: Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive inherited disease, which is characterized by developmental abnormalities, progressive bone marrow failure and a predisposition to cancer. The phenotypes of FA cells show extreme sensitivities towards oxygen and DNA cross linking agents, such as diepoxybutane and mitomycin C (MMC).

Methods: In the current study, retroviruses expressing the FANCA gene were prepared to create the stable cell lines, Hela (cervical carcinoma) and MCF10A (breast). The expression of FANCA protein in the Hela and MCF10A stable cells, following puromycin selection, was checked using Western blot. The difference in the cell growth between the parent and FANCA expressing cells following MMC treatment was checked using the MTT assay.

Results: The expression of exogenous FANCA protein in the Hela and MCF10A stable cells was observed using Western blot. The MCF10A cells expressing exogenous FANCA were resistant to MMC concentrations with the range 0.01~1μM compared with the MCF10 parent cells. However, at an MMC concentration of 10μM, there was no difference in the susceptibility between the parent and FANCA expressing MCF10 cells. The Hela cells expressing FANCA showed no resistance at any MMC concentration (0.01~10μM).

Conclusion: FANCA protein is an important factor for resistance to the cross linking agent, MMC, in MCF10A breast cells, but not in Hela cervical carcinoma cells.

키워드

Fanconi anemia;FANCA;Hela cell;MCF10A cell
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