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한국재래닭 (오계) 원시생식세포의 완만동결과 급속동결의 비교

Comparison of Vitrification and Slow Freezing for the Cryopreservation of Chicken Primordial Germ Cell (Ogye)

한국축산학회지 2013년 55권 5호 p.417 ~ 425
김성우 ( Kim Sung-Woo ) - 농촌진흥청 국립축산과학원

고응규 ( Ko Yeoung-Gyu ) - 농촌진흥청 국립축산과학원
변미정 ( Byun Mi-Jeong ) - 농촌진흥청 국립축산과학원
도윤정 ( Do Yoon-Jung ) - 농촌진흥청 국립축산과학원
한재용 ( Han Jae-Yong ) - 서울대학교 동물자원과학과
김동훈 (  ) - 농촌진흥청 국립축산과학원
성환후 ( Seong Hwan-Hoo ) - 농촌진흥청 국립축산과학원
김현 ( Kim Hyun ) - 농촌진흥청 국립축산과학원

Abstract

동결 닭 PGCs의 생식계열 키메라를 이용한 생체에의 복원을 실용화 하기 위해서는, 닭 PGCs의 동결보존기술의 향상에 의해 동결 및 융해 후의 많은 생존세포를 확보 하는 것과, 생식계열 키메라의 제작효율을 높이는 것이 반드시 필요하다. 닭 PGCs는 배양 5.5일령의 닭 원시생식선으로부터 채취하고, ACS 방법에 의해서 순수 닭 PGCs를 분리했다. 닭 PGCs의 동결보존실험결과 다음의 4종류의 동결방법을 각각 비교 검토했다. 1. 플라스틱 스트로에 의한 완만동결법 (SF), 동결보호물질은 2M 에틸렌 글리콜 (EG), 2. 스트로에 의한 급속동결법 (RF), 8M EG + 7% PVP, 3. 동결용 Cryotube에 의한 SF, 2M EG, 4. 튜브에 의한 SF, 10% DMSO. 동결 및 융해 후의 PGCs의 생존율은 각각 76.4%, 70.6%, 80.5%, 78.1%로 관찰되었다.

We sought to provide a method for freezing and preserving primordial germ cells, or an avian germ cell of a bird, as a material for developmental engineering or species preservation. The aim of this study was to compare the efficacy of slow freezing with a vitrification method for the cryopreservation of chicken primordial germ cells(PGCs). PGCs obtained from the germinal gonad of day 5.5-6 day(stage 28) cultured chick embryos, using the MACS method, were classified into two groups: slow freezing and vitrification. We examined the viability of PGCs after Cryopreservation. Four freezing methods were compared with each other, including the following: Method 1: The PGCs were frozen by a programmed freezer in a plastic straw, including 2.0M ethylene glycol(EG) as cryoprotective additive(slow freezing) Method 2: The PGCs were vitrified in a plastic straw, including 8.0 M EG, plus 7% polyvinylpyrrolidone(PVP)(rapid freezing). Method 3: The slow freezing was induced with a cryotube including 2.0 M EG Method 4: The PGCs were frozen in a cryotube including 10% dimethyl suloxide(DMSO)(rapid freezing). After freezing and thawing, survival rates of the frozen-thawed PGCs from Method 1 to 4were 76.4%, 70.6%, 80.5% and 78.1%(p<0.05), respectively. The slow freezing(-80℃ programmed freezer) method may provide better survival rates of frozen-thawed PGCs than the vitrification method for the cryopreservation of PGCs. Therefore, these systems may contribute to the cryopreservation of a rare avian species.

키워드

원시생식세포; 급속동결; 완만동결; 생존율; 오계
Primordial germ cells (PGCs); EG; Viability; Korean native chicken (Ogye); Slow freezing
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