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인유두종바이러스 검출을 위한 상용화된 cDNA 합성 키트의 평가

Evaluation of Commercial Complementary DNA Synthesis Kits for Detecting Human Papillomavirus

대한임상검사과학회지 2019년 51권 3호 p.309 ~ 315
유광민 ( Yu Kwang-Min ) - 연세대학교 임상병리학과

박선영 ( Park Sun-Young ) - 연세대학교 기계공학과
장연희 ( Chang Yun-Hee ) - 연세대학교 임상병리학과
황다솜 ( Hwang Da-Som ) - 연세대학교 임상병리학과
김지혁 ( Kim Gee-Hyuk ) - 식품의약품안전처 의약품안전국
김정호 ( Kim Jung-Ho ) - 국제결핵연구소 백신연구부
김성현 ( Kim Sung-Hyun ) - 부산가톨릭대학교 임상병리학과
김은중 ( Kim Eun-Joong ) - 충북보건과학대학교 임상병리과
이동섭 ( Lee Dong-Sup ) - 혜전대학교 임상병리과

Abstract

자궁경부암은 전 세계적으로 네번째를 차지하는 여성암이다. 자궁경부암의 대부분 원인은 인유두종 바이러스의 감염이다. 인유두종 바이러스를 검출하기 위해 다양한 분자진단학적방법들이 고안되었다. 분자진단학적 방법 중의 real-time PCR 은 목표 DNA 또는 RNA의 정량과 민감도 향상을 목표로 도입되었다. 특히, real-time PCR 과정은 수행 전에 RNA 추출 및 상보적인 DNA 합성 과정이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 민감하고 적합한 상보적인 DNA 합성 키트를 알아보기 위해서 상보적인 DNA 합성에 이용되는 두 개의 상용화된 키트를 평가하였다.
자궁경부암 세포주에서 두개의 상보적인 DNA 합성 키트의 R2 과 효율성을 비교한 결과 차이가 없었다. 그러나 Invitrogen 키트보다 Takara 키트가 102 및 103 SiHa 세포주에서 P<0.001를 나타내었고 101 및 102 HeLa 세포주에서도 P<0.001를 나타내었다. 이를 통해 Takara 키트가 Invitrogen키트보다 민감도가높음을 알 수 있었다. 또한 40개의 탈락세포검체의 8, 4, 2, 1 mL 을 이용하여 상보적인 DNA 합성 키트를 비교한 결과 Invitrogen 키트보다 Takara 키트가 8, 4, 1 mL에서 P<0.01 및0.5 mL에서 P<0.05을 나타내어 임상 검체를 이용하였을 때에도 Takara 키트가 Invitrogen 키트보다 민감도가 높음을 알 수있었다. 본 연구는 적합한 상보적인 DNA 합성 키트를 확인하기위해 수행되었으며, 상보적인 DNA 합성 키트가 real-time PCR 결과 다양성에 영향을 미친다는 것을 시사하였다

Cervical cancer is the fourth most common malignant neoplasm in women worldwide. Most cases of cervical cancer are caused by an infection by the human papillomavirus. Molecular diagnostic methods have emerged to detect the HPV for sensitivity, specificity, and objectivity. In particular, real-time PCR has been introduced to acquire a more sensitive target DNA or RNA. RNA extraction and complementary DNA synthesis are proceeded before performing real-time PCR targeting RNA.
To identify an adequate and sensitive cDNA synthesis kit, this study evaluated the two commonly used kits for cDNA synthesis. The results show that the R2 and efficiency (%) of the two cDNA synthesis kits were similar in the cervical cancer cell lines. On the other hand, the Takara kit compared to Invitrogen kit showed P<0.001 in the 102 and 103 SiHa cell count. The Takara kit compared to the Invitrogen kit showed P<0.001 in the 101 and 102 HeLa cell count. Furthermore, 8, 4, 2, 1, and 0.5 ml of forty exfoliated cell samples were used to compare the cDNA synthesis kits.
The Takara kit compared to the Invitrogen kit showed P<0.01 in 8, 4, and 1 ml and P<0.05 in 0.5 mL. The study was performed to identify the most appropriate cDNA synthesis kit and suggests that a cDNA synthesis kit could affect the real-time PCR results.

키워드

Cervical cancer; Complementary DNA; Complementary DNA synthesis kit; Human papillomavirus; Real-time PCR
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