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자궁경부암 세포주들에서 리포좀을 이용한 종양억제 유전자 (pRcCMVp53/liposome)의 직접 이입법에 의한 세포 성장 억제 효과

Growth Inhibitory Effect of Human Cervical Cancer Cells with the Direct Transfer of Liposome Complected Recombinant pRcCMVp53

대한산부인과학회지 1999년 42권 4호 p.862 ~ 870
김진철
서상용/신봉영/안웅식/한유진/이준모/남궁성은/이헌영/김승조

Abstract

목적: 자궁결부암 유전자 치료를 위하여 자궁경부암 세포주들에 리포좀을 이용한 종양억
제 유전자(wild-type p53 gene)의 직접 이입을 통하여 세포성장 억제효과를 보고자 하였다.
방법: 자궁암세포주들 (Caski, SiHa, HeLa, HeLaS3, C33A, HT3)을 12 well에
104, 96 well에 5×103의 수로 triplicate를 형성한 뒤 대조군,
pRcCMVp53, lipofectin, pRcCMV/lipofectin, pRcCMVp53/lipofetin이 함유되있는 것을 각기
12 well에 20 ㎕ 96 well에는 10 ㎕을 투여한 다음 7일간 배양하였다. 세포수 측정, ELISA
(neutral red) assay, MTT 등을 이용하여 세포성장과 cell viability를 측정하고 이를
one-way ANOVA F-test, multiple comparison Tukey method에, 의해 날짜별 서로 군의
차이를 비교하였다.
결과: p53 유전자에 의한 자궁경부암 세포주의 성장억제를 확인하기 위하여 세포 수 측
정, ELISA assay, MTT assay를 시행하였으며 각각의 assay에 대한 측정 마지막날인 6일
게를 기준으로 정상대조군 세포와 비교한 결과 세 포수 측정에서는 Caski(89%),
SiHa(59.2%), HeLa(86%), HeLaS3(78%), C33A(91%) 그리고 HT3(74%) 성장억제를 나타냈
다.
또한 Neutral red를 이용한 세포 viability assay 에서는 Caski(70%), SiHa(93%),
HeLa(73%), HeLaS3(50%), C33A(67%) 그리고 HT3(52%)에서 는 52%의 세포감소를 보여
주었다. MTT assay를 통한 각각의 자궁경부암 세포주의 세포성장억제 결과는 Caski(38%),
SiHa(72%), HeLa(53%), HeLaS3(28%), C33A(33%)그리고 HT3(53%)였다.
결론: 자궁경부암 세포주에 직접 이입법을 통한 유전자 전달 후 세포성장 억제는 매우 유
익하게 감소되었으며 이와 같은 결과는 향후 유전자 직접 이입법에 의한 자궁경부암 환자에
있어서 유전자 치료를 실시할 수 있는 새로운 장으로 생각이 되어진다.

Purpose: We investigated cell growth inhibitory effect of the wild type p53 gene into
the cervical cancer cells via the recombinant p53 plasmid, pRcCMVpS53 with lipofectin.
Method: Inhibition of the growth of cervical cells as determined by a cell count assay.
The cells were inoculated at density of 104 cells/well in each 12 well
plate, 24 hrs before infection. At each indicated point, cells in three wells on each well
plate were trypsinized and counted. The mean cell counts of triplicated well after
transfection at day 1-6 was checked. Inhibition of the growth of cervical cells were
checked by ELISA assay, MTT assay. The cells inoculated at densities of 5×
103/well in each 96 plate 24 hrs before infection. At each indicated point
cells of three well were transfected for 6 days, harvested and counted by liquid
scintillation counter the mean cpm per triplicate wells were plated for EUSA and MTT
assay. One-way ANOVA F-test and multiple comparison Tukey method was used for
statistical analysis.
Result: Inhibition of the growth of cervical cells in cell count showed CaSki(89%),
SiHa(59.2%), HeLa(86%), HeLaS3(78%), C33A(91%) and HT3(74%). ELISA assay
showed Caski(70%), SiHa(53%), HeLa(73%), HeLaS)(50%), C33A(67%) and HT3(73%).
MTT assay showed HeLa(33%), HeLaS3(28%), SiHa(75%), Caski(38%), C33A(33%) and
HT3(53%).
Conclusion: These results indicate that transfection of cervical cancer cells with the
wild type p53 gene via pRcCMVp53 with lipofectin is a potential novel approach to the
gene therapy of cervical cancer

키워드

p53; pRcCMVp53; 자궁경부암; 유전자치료; Lipofectin; p53; pRcCMVp53; cervical cancer; gene therapy;
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