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BSA, Glucose및 Phosphate가 1세포기 생쥐수정란의 체외배양시 2-cell block과 배 발달에 미치는 영향

Effects of BSA, glucose and phosphate on 2-cell block and blastocyst development of 1-cell mouse embryos during in vitro culture

대한산부인과학회지 2000년 43권 12호 p.2274 ~ 2282
김선행/Sun Haeng Kim
이용호/이정재/안일중/장기훈/김탁/Yong Ho Lee/Jung Jae Lee/Il Joong An/Gee Hoon Jang/Tak Kim

Abstract

목적 : 여러 종의 포유류에서 수정란의 체외 배양시 특정 단계에서 발생 정지 (in vitro culture block)현상이 보고되면서, 이러한 현상에 관한 연구는 배양액의 기본 성분인 glucose 및 phosphate, 그리고 BSA의 농도가 배 및 배반포 발달에 영향이 있을 것으로
제기되었으며, 이를 알아보고자 실험을 계획하였다. 연구방법 : 기본 배양액으로 M16을 사용하여, 2-세포기 발달 정지 현상이 나타나는 ICR생쥐 1-세포기 수정난을 채취하여 배양하였다. 수정란의 체외배양은 첫 48시간 동안 다른 농도의 BSA (0-15%)하에서
이루어졌고,
48시간 이후 72시간 동안의 배양은 첫 48시간의 BSA 농도와 같은 농도를 사용한 군과 0.3%로 고정된 BSA를 사용한 군으로 나누어 이루어졌으며 각각 2 cell block의 극복율과 배발달율을 확인하였다. 또한 glucose와 phosphate의 효과를 확인하기 위해 배양액에서

48시간 동안은 제거하였으며 48시간 이후 72시간 동안은 제거한 군과 첨가한 군으로 나누어 실험하였다. 결과 : 1. 1-세포기 생쥐 수정란의 배양시 첫 48시간 동안 BSA 농도가 증가할수록 2 cell block의 극복율이 증가함을 알 수 있었지만, 48시간 이후의
배양액에서는
BSA 농도가 증가하여도 배발달율에는 영향을 미치지 못하였다. 2. 초기 배양액에서 glucose 및 phosphate를 각각 혹은 동시에 제거한 경우 BSA의 농도가 높아질수록 2 cell block의 극복율과 배반포율도 증가하지만 후기 배양액(48시간 이후)에서 glucose와
phosphate의
조성의 변화는 배반포율에 영향을 미치지 못하였다. 또한, 배양액의 BSA 농도가 증가할수록 glucose 및 phosphate를 제거한 후 발생하는 2 cell block의 극복율과 배반포율은 증가하였다. 결론 : 이상의 결과는 1세포기 생쥐 수정란의 체외 배양시 발생하는 2세포기
정지현상의 극복하고 지속적인 배발달을 유지하기 위해 BSA의 농도를 증가시키고, 특히 초기배양에서 glucose 및 phosphate를 제거하는 것이 바람직한 배양 방법으로 생각된다.

Objective : To assess the effect of BSA, glucose and phosphate addition to a chemically defined medium (M16) on the development of mouse one-cell embryos in vitro. Method : Harvested mouse (ICR) one-cell embryos were cultured for 48 hours using
M16
solution with various concentrations (0-15%) of BSA. First, mouse 1-cell embryos were devided into two groups. One group of them was cultured under the same condition for further 72 hours and the other group was cultured in the media with fixed
concentration (0.3 %) of BSA, and evaluated the effect of the media on the 2-cell block and further embryonal development. Secondly, the effects of removal of glucose and/or phosphate from the BSA conditioned culture media (M16) on the
development
of
mouse embryo were also evaluated. Results : Higher concentrations (0.9-1.5 %) of BSA in the culture media during the first 48 hours of 1-cell mouse embryo culture overcome 2-cell block significantly, however, the continued exposure to higher
concentrations after 48 hours do not influence further development. Removal of glucose and/or phosphate from the culture media during the early stage (first 48 hours) of culture showed significant overcoming of 2-cell block and increased the
blastulation rate, but after the first 48 hours of culture, the absence or presence of glucose and/or phosphate do not influence the further embryonal development.Finally, the positive effects of the removal of glucose and/or phosphate are also
augmented with the increased BSA concentration of the culture media. Conclusion : Increased BSA concentration and removal of glucose and/or phosphate during the early stage of culture may have favorable effect on 2-cell block and further
development of
mouse embryo in vitro.

키워드

BSA; glucose; phosphate; 생쥐수정란의 2세포기 정지현상; 배반포율; BSA; glucose; phosphate; mouse embryo 2-cell block and blastocyst formation;
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