잠시만 기다려 주세요. 로딩중입니다.

HPV E6 발암단백과 결합하는 CDC7 단백의 기능분석

Functional analysis of CDC7 protein which is interacted with HPV E6

대한산부인과학회지 2007년 50권 3호 p.459 ~ 464
동서연 ( Tong Seo-Yun ) - 가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실

김정진 ( Kim Jung-Jin ) - 가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
조양숙 ( Cho Yang-Sook ) - 가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실
박종섭 ( Park Jong-Sup ) - 가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실

Abstract

목적: 인유두종 바이러스의 발암기전과 관련된 물질을 찾기 위해 Yeast two hybrid assay를 통해 HPV E6와 결합하는 것으 로 선별된 cell division cycle 7-related protein kinases (CDC7)의 기능을 알아보고자 한다.

연구방법: E6와 결합하는 단백을 선별하기 위해 human HeLa cDNA library를 prey로 하고 HPV E6를 bait로 하여 yeast two hybrid를 시행한 후, 여기서 E6와 결합한다고 선별된 CDC7과의 반응을 확인하기 위해 immunoprecipitation assay를 시행 하였다. CDC7과 E6가 세포에 미치는 영향을 보기 위해 세포주기분석을 시행하였다.

결과: yeast two hybrid와 immunoprecipitation assay를 이용하여 E6와 결합하는 신규단백으로서 CDC7을 확인할 수 있었고, E6의 발현을 감소시켰을 때와 마찬가지로 CDC7에 siRNA를 처리하였을 때 역시 세포사멸이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 그러나, CDC7과 E6를 동시에 억제하였을 때 세포사멸에 대한 상승작용을 관찰할 수는 없었고, CDC7과 E6의 발현을 증가시켰을 때도 세포주기에 특이한 변화는 없었다

결론: 이번 실험을 통해 HPV E6와 결합하는 신규 단백을 발굴하였고, CDC7이 세포사멸에 영향을 주는 것은 확인할 수 있었으나 향후 부가적인 기능을 탐구하기 위한 연구가 더 필요할 것으로 사료된다.

Objective: Human papillomaviruses are associated with the majority of cervical cancers. There is a wide effort focused on searching for the target of the involvement of p53-independent HPV-16E6 interacting proteins. We identified Cdc7 (cell division cycle 7-related protein kinases) as a binding partner of E6 and investigated its biological function in cervical cancer cells.

Methods: The baits, E6, fused to the LexA-BD subunit using pBTM116 vector were used to screen an oligoneucleotide primed human HeLa cDNA library cloned in pGAD10 vector. Yeast two-hybrid screens were performed. Immunoprecipitation assay was performed to determine whether E6-Cdc7 interaction occurred. Cells treated with siRNA were analysed by flow cytometry.

Results: We have delinated the interactions of E6 with five proteins, namely the IRF-3 (interferon regulatory factor-3), PRKCL-1 (protein kinase C-like 1), PIST (PDZ/coiled-coil domain binding gene), BARD1 (BRCA1 assocated ring domain 1), and Cdc7. The in vitro result of the interaction between E6 and Cdc7 was confirmed by immunoprecipitation experiments. Down-regulation of Cdc7 by small interfering RNA in HeLa cell lines causes an abortive S phase, leading to cell death.

Conclusion: We have identified the new protein of interaction with HPV E6, Cdc7 kinase. It has been implicated in S phase signaling of cell cycle and the inhibition of Cdc7 induced cell death. But, further investigation is needed to know the biologic function of Cdc7 kinase in cervical carcinogenesis.

키워드

자궁경부암;인유두종 바이러스;E6;Cdc7 kinase
Cervical cancer;Human papillomavirus;E6;Cdc7 kinase
원문 및 링크아웃 정보
  
등재저널 정보
KCI
KoreaMed
KAMS