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Double density gradient방법을 이용한 임신 초기와 중기에 있어서 태아유핵적혈구 수집률의 비교

Comparision in the yield of fetal nucleated red blood cell between the first-and second-trimester using double density gradient centrifugation

대한산부인과학회지 2010년 53권 2호 p.127 ~ 136
전여진 ( Jeon Yeo-Jin ) - 이화여자대학교 의학전문대학원 생화학교실

권경훈 ( Kwon Kyung-Hun ) - (주)젠딕스
김종원 ( Kim Jong-Won ) - (주)바이오메드랩
방명걸 ( Pang Myung-Geol ) - 중앙대학교 동물자원과학과
정성철 ( Jung Sung-Chul ) - 이화여자대학교 의학전문대학원 생화학교실
김영주 ( Kim Young-Ju ) - 이화여자대학교 의학전문대학원 산부인과학교실

Abstract

목적: 본 논문은 임신부의 혈액 내 태아유핵적혈구를 임신 초기와 임신중기 중 언제 더 많이 얻을 수 있는지에 관하여 연구하고자 하였다.

연구 방법: 임신 초기와 중기의 임신부의 혈액 10 mL으로부터 유핵적혈구를 다른 삼투압을 이용한 double percoll gradient방법을 이용하여 분리하였으며 Magnetic activated cell sorting방법과 Kleihauer-Betke 염색 및 Fluorescence In Situ Hybridization (FISH)를 이용하여 태아의 성과 염색체 이수성을 진단하였다.

결과: 임신 초기에 얻은 유핵 적혈구의 수는 9.88이었고 임신중기에 얻은 유핵적혈구는 14.88이었으며 이들간에는 통계적인 유의성이 없었다 (P=0.07). 임신 초기에 얻은 Y염색체를 가진 유핵적혈구의 수는 5.73이었고 임신 중기에 얻은 Y염색체를 가진 유핵적혈구의 수는 8.22로 역시 두 군간에 유의한 차이가 없었다 (P=0.56). 그러나 임신 초기에 Y염색체를 가진 유핵 적혈구의 퍼센트는 임신중기의 경우보다 유의하게 높았다 (P=0.049). 이 방법을 이용하여 태아 이수성을 가진 7명의 임신부에게서 얻은 혈액으로부터 얻은 유핵적혈구는 18.4개였다.

결론: 따라서 퍼콜의 삼투압과 double gradient method는 임신 초기와 중기 모두에서 유핵 적혈구를 분리하는데 매우 유용한 방법으로 생각된다.

Objective: The aim of our study was to make a practical comparative evaluation of the first and second trimesters in order to determine the period during which a higher yield of fetal nucleated red blood cells (FNRBCs) can be obtained.

Methods: NRBCs were isolated from maternal blood during the first and second trimesters of pregnancy using double Percoll gradients with different osmolarities. Magnetic activated cell sorting was performed with Kleihauer-Betke stain. We isolated fetal NRBCs from 10 mL of samples of maternal blood and determined fetal sex and fetal aneuploidy by fluorescence in situ hybridization (FISH).

Results: The average number of NRBCs was 9.85 in samples obtained during the first trimester and 14.88 in samples obtained during the second trimester (P=0.07). The average number of NRBCs with Y chromosome signals was 5.73 in the first trimester and 8.22 in second trimester (P=0.56). However, the percentage of NRBCs with Y chromosome signals in the first trimester (70.6%) was significantly higher than in the second trimester (59.8%) (P=0.049). We diagnosed the blood samples from 7 pregnant women having fetal aneuploidy using this method and the number of NRBCs was 18.4.

Conclusion: The method using Percoll osmolarity and a double density gradient system may be a very useful method for separation of NRBCs in the first trimester of pregnancy and also in the second trimester.

키워드

태아유핵적혈구;태아세포분리;자기장 활성세포분리방법;이중밀도 차이시스템;산전진단
Fetal nucleated red blood cell;Fetal cell isolation;Magnetic activated cell sorting;Double density gradient system;Prenatal diagnosis
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