조직배양에 의한 Marek 병 병원체의 연구
CELL CULTURE STUDIES OF MAREK´S DISEASE ETIOLOGICAL AGENT
김우호,
소속 상세정보
김우호 ( ) - Chunchon Aricultural College
KMID : 0359319690090021023
Abstract
鷄白血病및 "鷄白血病群"속에 오래도록 包含되어 오든 Marek 病은 오늘날 養鷄産業에 있어 가장 問題視되는 疾病의 位置를 占하고 있다. 迅速하고 大規模的인 養鷄産業의 發展과 더불어 이들 疾病에 의한 經濟的損失은 莫大한 것이며 더구나 過去 數年에 걸쳐 歐美에서 急性型 Marek 病이 出現, 菱延하므로서 Marek 病은 가장 興味있는 疾病의 하나로 登場하게끔 되었다.
지난 몇년동안에 이들 疾病에 關하여 새롭고 意義있는 硏究業績이 이룩되었으며 그 중에서도 가장 重要한 進展은 只今까지 "鷄白血病群"이라는 한 묶음의 通稱속에 包含되어오든 이들 新生物腫瘍疾患이 두가지의 明白한 疾病徵候로 나누어진 事實일 것이다. 所見上 類似한 腫瘍을 惹起하는 이들 疾病의 分離를 위한 첫째 根據는 勿論 그들의 病因의 差異에 의한 것이며, 이것은 또한 疾病分類에 있어 가장 重要한 觀點이 되는 것이다.
그러나 이와같은 分離를 위한 證明은 不過 一年餘前 各各 다른 Mare k病 病因分離株로, 英國 및 美國의 두 硏究團이 獨立的으로 同時에 組織培養에 의하여 Marek 病病因의 가장 有力한 候補로서 한 herpes virus를 發見, 示顯하므로서 이루어졌다. 實上 1954年 以來, 그 病因이 確實히 究明되지는 못하였지만 野外에서의 傳染力, 實驗的傳達試驗等에 의하여, 이 疾病이 myxovirus에 의한 鷄白血病과는 다른 徵候일것이라는 것이 여러 學者들에 의하여 主張되어 왔다. 組織培養에 의한 Marek 病 病因의 確認이 비록 豫備的實驗段階에 있기는 하나 本病 硏究의 한 큼직한 突破口를 이룩하였다고 볼 수 있으며 따라서 Marek 病과 herpes virus와의 相互關係(病因으로서의)의 더 進展된 硏究가 時急히 要請되고있는 것이다.
本實驗은 Marek 病病因을 檢索分析하기 위한 組織培養法을 더욱 進展시키므로서 GF 定型 Marek 病(Keny et al., 1964)과 CR-64 急性型 Marek 病(Staples, 1964)의 病因을 究明하여 그 分離病因株의 特性을 分析, 또한 宿主一細胞間의 相互關係를 밝히고 더 나아가 Marek 病의 各各 다른 分離株間의 病因의 差異如否, 또는 候補病因으로서의 herpes virus의 妥當性을 檢討코져 施行되었으며, 다음과 같은 實驗結課를 얻었다.
GF 定型 및 CR-64 急性型 Marek 病 感染鷄腎細胞의 一次的 單層(膜)培養細胞에 있어서 病因 virus의 增殖은 뚜렷이 變形된 腫瘍細胞化(圓形化)病巢의 形成으로 나타났으며 이 腫瘍(癌)細胞化病巢 形成의 特性은 感染된 培養細胞(脫落시킨)를 非感染腎細胞單層培養에 加하므로서(接種) 規則的으로 傳達(纖代)되었다. 또한 鷄胎兒好 및 腦神經膠培養細胞에도 腫瘍細胞化特性이 纖代될수 있었으나 正常鷄胎兒纖雜芽細胞培養에, 感染된 腎培養細胞를 接種하였을 때는 아무런 細胞變性(CPE)을 確認할수 없었다. 또한 兩型의 Marek 病 感染鷄로부터의 全血 및 buffy coat(末梢白血球-血漿)浮游液을 正常 鷄腎培養細胞에 接種하므로서도 똑같은 細胞變性을 나타내었으나 다만 이 경우에는 그 病巢數는 直接 Marek 病罹患鷄로부터 取한 腎細胞培養에 比하여 훨씬 적은 數로 나타났다. 實上 組織培養像에 關한 限 Marek 病의 GF定型分離病因株와 CR-64 急性型分離病因株間에는 아무런 差異點을 發見할 수 없었다.
이와같은 特性을 갖는 感染病因은 極度의 細胞結合性을 지니고 있었으며 本實驗條件下에서는 從屬되어있는 細胞들로부터 感染狀態의 病因을 分離하는 것은(遊離病因) 不可能하였으며, 따라서 繼代(傳達)接種物은 恒時 細胞含有物이 였다. 培養細胞에 있어서의 變性은, 非腫瘍惹起 virus에 의한 漸進的으로 이루어지는 細胞變性인 plaque인것 보다 오히려 膿瘍惹起 virus에 의한 持異的細胞變形病巢(focus)로 보여졌으며 그 樣相은 여러가지 觀點에서 鷄胎兒纖維芽培養細胞上에서의 Rous sarcoma virus의 그것에 類似하였다.
本 病因의 病巢分析은 接種된 感染細胞濃度와 計數된 圓形化病巢間에 高度의 直線相關關係를 表示하였다.
兩 分離病因株感染腎培養細胞의 理化學的 處理에 의한 持性分析, 核內封入體의 形成과 鑑別染色法 및 細胞化學的 處理에 의한 virus의 核酸型判別等은 이들 圓形化病巢形咸能力을 지닌 分離病因株의 性狀이 B群 herpes virus의 그것과 極히 類似함을 나타내었으며, 그外에 여러가지 分析方法에 의하여 이 病因들이 鷄白血病/肉腫群 virus들 및 PPLO들과는 全然 相關關係가 없음이 밝혀졌다.
感染腎培養細胞의 陰性染色法에 의한 電子顯微鏡觀察은 herpes virus樣 特性을 갖춘 vius粒子들을 밝혀 내었으며 또한 感染腎培養細胞의 無 白血病/Marek 病 感受性鷄離로의 接種結果는 Marek 病의 特異的病變을 鷄離에 發顯시켰으며, 殺處分後 該 鷄離들로부터의 腎細胞培養에 있어서도 明確한 細胞變形에 의한 病巢形成(癌細胞化)特性을 훌륭히 再現시켜 주었다.
이와같은 實驗結果로서 培養細胞를 壤死시키지 않고 變形(transformation) 시키는 能力을 지닌 이들 分離株는 Marek 病病因 그것이며, 多分히 B群 herpes virus에 屬하는 한 멤버-임이 斷定되었으며, 또한 이들 virus群의 어떤것들은 高度의 腫瘍惹起特性(oncogenicity)을 지니고 있을 것으로 推定되었다.
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