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대식세포에서 Nrf2/HO-1경로를 통한 청심연자음의 항산화효과

Anti-oxidative Effect of Chungsimyeonja-um (CSYJE) via Nrf2/HO-1 Pathway Activity in Lipopolysaccharide (LPS) Induced RAW 264.7 Macrophages

대한화장품학회지 2020년 46권 3호 p.253 ~ 263
전선홍, 오솔라, 김소정, 전보희, 성진영, 김용민,
소속 상세정보
전선홍 ( Jeon Seon-Hong ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences
오솔라 ( Oh Sol-La ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences
김소정 ( Kim So-Jeong ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences
전보희 ( Jeon Bo-Hee ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences
성진영 ( Sung Jin-Young ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences
김용민 ( Kim Yong-Min ) - Semyung University Department of Cosmetic Sciences

Abstract

활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 우리 몸의 항상성 유지에 있어 중요한 역할을 한다. 그러나 과도한 ROS의 생성은 단백질, 지질, 핵산과 같은 세포 구성성분을 손상시키고 피부노화를 촉진시킨다. 이에 본 연구에서는 과도한 산화 스트레스를 예방하기 위해 Chungsimyeonja-um (CSYJE)의 항산화 효과를확인하였다. 먼저 DPPH 및 ABTS assay를 실시하여 CSYJE의 항산화 효과를 확인한 결과 농도 의존적으로radical 소거 활성을 확인하였다. 세포생존율 확인을 위해 MTT assay를 실시한 결과 1,000 μg/mL 농도에서세포 독성이 없음을 확인하였다. 항산화 관련 단백질인 nuclear-E2-related factor 2 (Nrf2), Heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현 수준을 확인하기 위해 western blotting을 실시한 결과 농도 의존적으로 발현이증가하는 것을 확인하였다. 세포 내 ROS유발 물질인 lipopolysaccharide (LPS)로 ROS를 유도한 후, ROS생성억제효과를 확인하기 위해 DCF-DA 염색법을 실시한 결과 농도 의존적으로 ROS 생성 억제효과를 확인하였으며 ROS의 생성으로 인한 염증성 사이토카인과 염증인자의 mRNA발현 수준을 확인하기 위해 real-time RT-PCR을 실시한 결과 농도 의존적으로 염증성 사이토카인과 염증인자의 mRNA 발현을 억제시켰다. 따라서, 본 연구는 Nrf2/HO-1 신호 전달 경로 활성을 통해 CSYJE의 항산화효과를 확인했으며 이는 CSYJE가활성산소를 억제하여 항산화 화장품의 재료로서 사용될 수 있음을 시사한다.

Reactive oxygen species (ROS) plays an important role in maintaining homeostasis. However, excessive ROS production damages cellular components such as proteins, lipids, and nucleic acids and promotes skin aging. In this study, we confirmed the antioxidant effect of CSYJE to prevent excessive oxidative stress. First, DPPH and ABTS assays were performed to confirm the antioxidant effect of CSYJE and the radical scavenging activity was confirmed depending on the concentration. As a result of performing the MTT assay to confirm the cell viability, it was confirmed that there was no cytotoxicity at a concentration of 1,000 μg/mL. As a result of western blotting to confirm the expression levels of the antioxidant-related proteins nuclear-E2-related factor 2 (Nrf2) and Heme oxygenase-1 (HO-1), it was confirmed that the expression was increased in a concentration-dependent manner. After inducing ROS with lipopolysaccharide (LPS), an intracellular ROS-causing substance, DCF-DA was performed to confirm the inhibitory effect of ROS production, and the inhibition of ROS production was confirmed to concentration-dependent. Real-time RT-PCR was performed to confirm the mRNA expression level of inflammatory cytokines and inflammatory mediator caused by ROS generation, mRNA expression was reduced in a dose dependent manner. Therefore, this study confirmed the antioxidant effect of CSYJE through the Nrf2/HO-1 signaling pathway, which suggests that CSYJE can be used as an antioxidant cosmetic material by inhibiting free radicals.

키워드

anti-oxidative; Chungsimyeonja-um (CSYJE); HO-1; Nrf2; RAW 264.7

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